康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达

doi:10.3969/j.issn.0254-5071.2011.02.023

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中国酿造 ›› 2011, Vol. 30 ›› Issue (2) : 76-80. DOI: 10.3969/j.issn.0254-5071.2011.02.023

研究报告

康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达

黄时海;康超;黄飞;曹喜秀;何鑫平;汪晟;吴孔阳;曹普美;梁智群;李湘萍

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Cloning of CBHI gene of Trichoderma koningii cellulase and expression in Escherichia coli

HUANG Shihai;KANG Chao;HUANG Fei;CAO Xixiu;HE Xinping;WANG Sheng;WU Kongyang;CAO Pumei;LIANG Zhiqun;LI Xiangping

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摘要

将康氏木霉(Trichoderma koningii)总RNA反转录成cDNA第一链,并以之为模板进行RT-PCR,合成约1.5kb的纤维二糖水解酶Ⅰ(cbh I)基因.cbhI基因经测序确认后克降到表达载体pET-30a(+)上,PCR和双酶切鉴定筛选阳性重组子;将阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS,并用0.4mmol/L的IPTG诱导表达重组蛋白.实验结果:cbhI基因在BL21(DE3)plysS中胞内融合表达,重组蛋白pNPC酶活为15.6U/L,最适反应温度为45℃,最适pH值为5.0,Mn2+对酶活力有明显的促进作用,SDS-PAGE表明重组蛋白分子量约为70kDa.

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黄时海;康超;黄飞;曹喜秀;何鑫平;汪晟;吴孔阳;曹普美;梁智群;李湘萍. 康氏木霉纤维素酶CBHI基因克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 中国酿造, 2011, 30(2): 76-80 https://doi.org/10.3969/j.issn.0254-5071.2011.02.023

HUANG Shihai;KANG Chao;HUANG Fei;CAO Xixiu;HE Xinping;WANG Sheng;WU Kongyang;CAO Pumei;LIANG Zhiqun;LI Xiangping. Cloning of CBHI gene of Trichoderma koningii cellulase and expression in Escherichia coli[J]. China Brewing, 2011, 30(2): 76-80 https://doi.org/10.3969/j.issn.0254-5071.2011.02.023

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2011-02-15
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2011-02-25

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