我国饮酒文化源远流长，酒类是日常生活中较为常见的消费品，但乙醇摄入无安全阈值，据世界卫生组织统计，乙醇是全球导致疾病的第3大危险因素，其所引起的疾病负担占全球疾病负担的4%[1-2]。肝脏是乙醇代谢的主要器官，乙醇在体内经过肝脏酶（乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase，ADH）和乙醛脱氢酶等）代谢后排出[3]。过度饮酒不仅麻痹中枢神经，同时乙醇代谢可引起机体自由基水平快速增加、抗氧化物耗竭，从而引起肝脏氧化应激损伤，进而推动酒精性肝病（alcoholicliver disease，ALD）的发生发展[4]。ALD是危害人体健康的主要肝脏疾病之一，包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎等，该疾病会引发机体多项生化指标异常，表现为丙二醛（malondialdehyde，MDA）等氧化损伤标志物升高；白介素（interleukin，IL）-1、IL-6、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α，TNF-α）等炎症因子水平升高；超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、谷胱甘肽（glutathione，GSH）等抗氧化物质水平下降等[5-6]。ALD发病机制较为复杂，包括氧化应激损伤、细胞因子介导的炎症反应、肠道屏障受损及肠道微生态失调等。
目前市场上的解酒护肝药物主要分为化学合成药物、天然植物药物两大类。化学合成解酒药物（如RU-21、纳洛酮等）虽已被证实具有解酒作用，但对酒精性肝损伤治疗效果有限[7]。研究表明，多糖、黄酮等天然植物或中草药提取物可加速乙醇代谢分解，有效降低血乙醇浓度、缩短醉酒时间，还可显著增强肝细胞内抗氧化酶系活性，减轻自由基等代谢有害物质对肝细胞的损伤[8-11]。因此，天然药食同源类解酒产品的研发和应用成为当下热点。
枳椇子果为鼠李科枳椇子属北枳椇子（Hoveniadulcis Thunb.）的膨大果序，肉质肥厚，口味独特，传统中医认为枳椇子具有解酒毒、止渴除烦、止呕、利二便的功效。现代药理学研究表明，枳椇子多糖、黄酮类和三萜类化合物是枳椇子的主要活性成分，可通过调节ADH等活性促进乙醇代谢，通过抗炎、抗脂质过氧化等改善酒精性肝损伤[12]。葛根为豆科植物葛（Puerariamontana var. lobata）的干燥根，作为药食同源植物，始载于《神农本草经》，在我国已有3 000多年的食用历史。《本草纲目》记载，葛根具有通脉醒酒、清热解毒等作用[13]。研究表明，葛根富含黄酮类、三萜皂苷类、多糖等多种活性成分，具有抗炎、抗氧化、降血脂、调节肝脏脂质代谢及预防和治疗酒精性肝损伤等功效[14-15]。桑葚为桑科桑属桑（Morus alba L.）的果实，历来作药食同源用，现代实验研究表明，桑葚果饮能增强肝组织中ADH活性，从而加速乙醇代谢，发挥防醉解酒作用[16]。目前，关于枳椇子与葛根配伍解酒保肝的相关研究较多[17]，而与桑葚联合用于解酒保肝的协同作用及制剂开发研究仍较匮乏。
因此，本研究在经典解酒药物葛根、枳椇子的基础上复配桑葚，探究三者解酒保肝的协同作用，以期开发一种原料天然、风味独特的解酒保肝泡腾片，并对其急性解酒和慢性酒精性肝损伤防护作用进行评价，为该类功能产品的后续开发与应用提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 动物、材料与试剂
无特定病原体级ICR小鼠160只（体质量（30±4）g）购自辽宁长生生物技术股份有限公司，动物生产许可证号SCXK（辽）2025-0001。动物实验经平顶山学院生物医学伦理委员会批准（批准号2025-014），动物饲养于平顶山学院动物实验中心，温度（25±2）℃，相对湿度（55±5）%，间隔12 h交替照明。
枳椇子、葛根、桑葚均为市售，经平顶山学院范卫卫 老师鉴定。
硝酸铝、氢氧化钠、柠檬酸、无水乙醇、麦芽糊精、固体石蜡、二甲苯、聚乙二醇6000、聚乙烯吡咯烷酮（polyvinyl pyrrolidone，PVP） 国药集团化学试剂有限公司；芦丁标准品、氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（oxidized nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+）、 苏木红-伊红（hematoxylin-eosin，HE）染色试剂盒、多聚甲醇固定液、甜糖菊 上海源叶生物科技有限公司；ADH、SOD、GSH、MDA、丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase，ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase，AST）、甘油三酯（triglyceride，TG）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基、2,2′-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)（2,2′-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)，ABTS）阳离子自由基、羟自由基测试试剂盒 南京建成生物工程研究所；RU-21解酒片 美国精神科学有限公司；北京红星二锅头白酒（乙醇体积分数52%） 北京红星股份有限公司。
1.2 仪器与设备
FA1104电子天平 上海舜宇恒平科学仪器有限 公司；TDP-6T单冲压片机 广州市祥明机械设备有限公司；PHS-3Cb pH计 上海越平科学仪器有限公司；Synergy H1全功能微孔板检测仪 美国伯腾仪器有限公司；ES500生物组织包埋机 金华市华速科技有限 公司；Axiocam ERc 5s正置显微镜 卡尔蔡司医疗技术（广州）有限公司。
1.3 方法
1.3.1 枳椇子、葛根、桑葚复合物配比筛选及体外 ADH激活率、抗氧化活性测定
超声法提取枳椇子、葛根黄酮，水提醇沉法提取桑葚多糖，冷冻干燥得各提取物，备用。采用瓦勒-霍赫法[16]测定ADH活性，用0.05 mL蒸馏水替代样品溶液作阴性对照。首先，考察枳椇子与葛根配比（10∶0、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9、0∶10）（以提取物质量比计，下同）对复合物ADH活性的影响，确定最佳配比后，二者再与桑葚多糖进行复配，考察枳椇子+葛根与桑葚质量配比（10∶0、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、5∶5、4∶6、3∶7、2∶8、1∶9、0∶10）对复合物ADH活性的影响，以确定三者最佳配比。
按下式计算ADH激活率，以评估枳椇子、葛根、桑葚复合物的体外解酒作用：
式中：U1为枳椇、葛根、桑葚解酒复合物的ADH活性/（U/mL）；U0为阴性对照组的ADH活性/（U/mL）。
以VC为阳性对照，评估质量浓度梯度0.05、0.10、0.25、0.50、0.75、1.00、1.25、1.50 mg/mL的复合物对DPPH自由基、ABTS阳离子自由基和羟自由基的清除能力。
1.3.2 枳椇子、葛根、桑葚复合物解酒泡腾片制备工艺优化
参考文献[18]的方法，采用酸碱两相湿法制备解酒泡腾片。将复合物与所有辅料分别过100目筛，分别称取柠檬酸和碳酸氢钠，加入PVP乙醇溶液，充分混合，得到酸碱颗粒（崩解剂），烘干研碎，加入复合物、矫味剂（甜菊糖）、填充剂（麦芽糊精），过14目筛，加入润滑剂（聚乙二醇6000）、黏合剂（PVP），混合均匀后压片成型。
1.3.2.1 工艺优化单因素试验
固定枳椇子、葛根、桑葚复合物20%，崩解剂60%，矫味剂5%，润滑剂4%，黏合剂1%，用麦芽糊精填充至100%。分别考察崩解剂酸碱比例（柠檬酸与碳酸氢钠质量比0.4∶1、0.6∶1、0.8∶1、1∶1、1.2∶1）、崩解剂添加量（50%、55%、60%、65%、70%）、矫味剂添加量（2%、3%、4%、5%、6%）对解酒泡腾片综合评分的影响。
1.3.2.2 工艺优化正交试验
在单因素试验的基础上，选择崩解剂酸碱比例（A）、崩解剂添加量（B）、矫味剂添加量（C）3个因素进行正交试验，以综合评分为评价指标，筛选泡腾片最佳制备工艺，正交试验因素与水平如表1所示。
表1 解酒泡腾片制备工艺优化正交试验因素与水平
Table1 Factors and levels of orthogonal test for process optimization of anti-hangover effervescent tablets
20.6∶160430.8∶1655水平A崩解剂酸碱比例B崩解剂添加量/%C矫味剂添加量/%10.4∶1553
1.3.2.3 综合评分测定
以崩解时限、产气量和感官评分按0.6∶0.2∶0.2权重计算综合评分，崩解时限、产气量及感官评价标准如表2、3所示。随机挑选6片泡腾片，按《中国药典》测定其崩解时限、pH值，采用失重法测定产气量，并选取10位评审员进行感官评价。
表2 解酒泡腾片崩解时限与产气量评价标准
Table2 Evaluation criteria for disintegration time and gas production volume of anti-hangover effervescent tablets
崩解时限/s评分产气量/g评分90～1004～50.08～0.090～1100～1103～40.09～0.101～2110～1202～30.10～0.112～3120～1301～20.11～0.123～4≥1300～1≥0.124～5
表3 解酒泡腾片感官评价标准
Table3 Sensory evaluation criteria for anti-hangover effervescent tablets
气味外观澄清度口感评分浓郁协果香调味，表完面整光，滑溶液无澄杂清质，酸甜可口4～5香无味稍异淡味，较较完光整滑，较杂为澄质清少，口感较好3～4少香许味异淡味，表有瑕面疵粗糙，溶有液浑杂质浊，偏酸或偏甜2～3无有香异味味，表不面完粗整糙，溶液杂质浑浊多，口感有涩一般味，0～2
1.3.3 解酒泡腾片对急性醉酒小鼠的解酒作用
1.3.3.1 小鼠急性醉酒模型建立
健康小鼠适应性饲养3 d，分为5组（n＝10）。禁食5 h，分别按0.100、0.125、0.150、0.175、0.200 mL/10 g的剂量灌胃乙醇体积分数52%的二锅头白酒。观察小鼠的醉酒情况（醉酒判定标准为小鼠翻正反射消失；醒酒判定标准为小鼠翻正反射恢复）、活动状态、死亡数量，计算醉酒率和死亡率。
1.3.3.2 解酒泡腾片体内急性解酒实验
将小鼠随机分为6组（n＝10），即空白组（0.9 g/100 mL生理盐水）、模型组（白酒造模后给予0.9 g/100 mL生理盐水）、阳性对照组（白酒造模后给予6 mg/mL RU-21，0.3 mL/10 g）、实验组1（高剂量组，白酒造模后给予12 mg/kg解酒泡腾片）、实验组2（中剂量组，白酒造模后给予6 mg/kg解酒泡腾片）及实验组3（低剂量组，白酒造模后给予3 mg/kg解酒泡腾片）。白酒灌胃20 min后，给予解酒药物，观察并记录小鼠醉酒潜伏时间（小鼠灌胃二锅头白酒到翻正反射消失的时间）、醉酒时间（从小鼠翻正反射消失到恢复所用的时间）、活动状态及死亡数量等。
1.3.4 解酒泡腾片对慢性酒精性肝损伤小鼠保肝作用
本研究采用长期、分梯度剂量给小鼠灌胃白酒的方式建立长期乙醇诱导肝损伤模型。小鼠分5组（n＝15）， 即正常组、模型组、单独给药组（20 mg/mL， 0.1 mL/10 g）、阳性对照组（6 mg/mL RU-21，0.3 mL/10 g）及实验组（20 mg/mL，0.1 mL/10 g）。灌胃给药0.5 h后，模型、阳性对照和实验组以9 mL/kg剂量灌胃白酒，每周增加1 mL/kg，持续8周，期间观察小鼠行为状态、精神状态、二便状态，每周记录体质量。最后一次灌胃后，小鼠禁食12 h，采用眼内眦取血，随后脱颈处死，采集血样与肝脏组织用于指标检测。其中血样静置2 h后，取上层清液，-20 ℃冰箱贮存待检；肝脏组织于-80 ℃冰箱贮存待检。
指标测定：使用HE染色法制备小鼠肝脏组织切片；取肝脏若干，冰冻切片，油红O染色；按试剂盒说明书分别测定血清中ALT、AST、TG、TC含量及肝组织匀浆ADH、MDA、SOD、GSH活性。
1.4 数据处理
采用SPSS 20.0统计软件进行统计分析，实验数据用x±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，以P＜0.05表示差异有统计学意义。采用GraphPad Prism 9.50软件进行绘图。
2 结果与分析
2.1 枳椇子、葛根、桑葚复合物的最佳配比及体外ADH激活作用
由图1可知，当枳椇子∶葛根＝4∶6时，ADH活性最高，为10 103.2 U/mL。将此配比的枳椇子葛根复合物与桑葚提取物组合，当（枳椇子+葛根）∶桑葚＝3∶7时，ADH活性最高，为10 689.2 U/mL，此时，枳椇子、葛根、桑葚复合物的最佳配比为12∶18∶70。在此配比条件下，解酒复合物溶液的质量浓度为2 mg/mL时，ADH活性达到最高，为23 912.8 U/mL；ADH激活率为56.4%，与RU-21组基本持平，说明该复合物具备开发高效解酒剂的潜力。
图1 不同枳椇子黄酮、葛根黄酮、桑葚多糖配比下复合物ADH活性及 体外ADH激活率
Fig.1 ADH activity and in vitro activation rate of compounds with different ratios of Semen Hoveniae flavonoids, Puerariae Lobatae Radix flavonoids and Mori Fructus polysaccharides
2.2 枳椇子、葛根、桑葚复合物的抗氧化活性
由图2可知，该复合物对ABTS阳离子自由基、DPPH自由基及羟自由基的清除率随复合物质量浓度增大而增大，ABTS阳离子自由基、DPPH自由基清除率接近于VC（最优清除率分别为98.81%、86.35%），表明枳椇子-葛根-桑葚复合物具有较好的抗氧化活性。
图2 椇子黄酮-葛根黄酮-桑葚多糖复合物的抗氧化活性
Fig.2 Antioxidant activity of the compound containing Semen Hoveniae flavonoids, Puerariae Lobatae Radix flavonoids and Mori Fructus polysaccharides
2.3 解酒泡腾片制备工艺优化结果
2.3.1 单因素试验结果
由图3可知，崩解剂酸碱比0.6∶1时，解酒泡腾片综合评分最高，为4.14分，因此选择崩解剂酸碱比0.6∶1作为正交试验的因素水平；崩解剂添加量为60%时，解酒泡腾片综合评分最高，为4.12分，因此选择崩解剂添加量60%作为正交试验的因素水平；矫味剂添加量为4%时，解酒泡腾片综合评分最高，为4.22分，因此选择矫味剂添加量4%作为正交试验的因素水平。
图3 不同因素对解酒泡腾片品质的影响
Fig.3 Effects of different factors on the quality of anti-hangover effervescent tablets
2.3.2 正交试验结果
由表4可知，以综合评分作为评价指标时，各因素对泡腾片品质影响的主次顺序为A＞B＞C，即崩解剂酸碱比例＞崩解剂添加量＞矫味剂添加量，其中崩解剂酸碱比例对泡腾片品质的影响最大，显著性最强（P≤0.01），筛选出最优组合为A2B2C2，即解酒泡腾片组成为崩解剂添加量60%、柠檬酸和碳酸氢钠比例0.6∶1、矫味剂添加量4%、聚乙二醇6000 4%、PVP 1%、麦芽糊精11%。在上述最优制备工艺条件下生产一组解酒泡腾片，测定其感官评分为（4.260±0.051）分，崩解时限为（95.000±1.290）s，产气量为（0.156 9±0.005 0）g，pH值为6.35±0.13，均满足《中国药典》及泡腾片制剂规范要求。
表4 解酒泡腾片制备工艺优化正交试验结果
Table4 Results of orthogonal test for process optimization of anti-hangover effervescent tablets
试验号ABC崩解时限/s产气量/g感官评分综合评分2111212111215300..012931 2033..0623..217731331180.111 73.72.9742131000.107 63.53.205221930.131 03.94.23762331221925400..019181 5644..1123..95009833233111119300..112143 9543..2633..4207k12.80 2.66 3.14 k23.78 3.56 3.26 k33.06 3.42 3.23 R0.980.900.11
2.4 解酒泡腾片对急性醉酒小鼠的解酒作用
2.4.1 小鼠急性醉酒模型灌酒剂量选择
如表5所示，小鼠醉酒率随着灌胃二锅头白酒剂量的增大而升高，当剂量达到0.175 mL/10 g时，醉酒率达到100%，死亡率为0%，剂量为0.200 mL/10 g时，小鼠出现死亡。因此，选择0.175 mL/10 g为小鼠急性醉酒模型的最佳白酒灌酒剂量。
表5 小鼠急性醉酒模型灌酒剂量筛选
Table5 Screening of Baijiu gavage dosage in mouse acute alcohol intoxication model
剂量/（mL/10 g）醉酒潜伏时间/min醉酒时间/min醉酒率/%死亡率/%0.10055.00±15.04101.33±71.463000.12565.00±13.75170.50±44.324000.15027.00±17.97194.83±50.877000.17527.80±21.25236.90±62.7710000.20021.38±17.13309.88±26.9110020
2.4.2 解酒泡腾片对急性醉酒小鼠醉酒潜伏时间及醒酒 时间的影响
如表6所示，模型组小鼠均出现醉酒，醉酒潜伏时间为16.43 min，醉酒时间为478.30 min；与模型组相比，阳性对照组与实验组均能明显缩短小鼠醉酒时间；其中中剂量组效果最优，3只小鼠未出现明显醉酒，醉酒时间为223.70 min（不到模型组的50%），醉酒潜伏时间为44.71 min（模型组的2倍以上）。相比于阳性对照组，各剂量泡腾片可明显延长小鼠醉酒潜伏时间，低、中剂量泡腾片可缩短醉酒时间，表明该解酒泡腾片具有较好的防醉、解酒功效，以中剂量组效果最优。
表6 解酒泡腾片对各组小鼠醉酒潜伏时间与醉酒时间的影响
Table6 Effects of anti-hangover effervescent tablets on alcohol latency time and drunkenness time of mice in each group
组别醉酒数量醉酒潜伏时间/min醉酒时间/min空白组000模型组1016.43±9.44478.30±97.96阳性对照组931.60±16.09317.40±120.29实验组1938.25±27.60262.20±150.08实验组2744.71±26.00223.70±162.87实验组31036.90±25.80335.70±110.87
注：未醉酒小鼠的醉酒时间为0 min，9 h未醒小鼠醉酒时间为550 min。
2.5 解酒泡腾片对慢性酒精性肝损伤小鼠的保肝作用
2.5.1 解酒泡腾片对慢性酒精性肝损伤小鼠体质量的影响
如图4所示，正常组体质量呈稳定增长趋势，单独给药组与正常组无明显差异，提示长期服用该解酒泡腾片对体质量无不良影响；模型组体质量明显下降，最终体质量变化率降至（0.86±0.05）%，表明白酒摄入严重干扰小鼠营养吸收与代谢功能；实验组与阳性组先下降后增长（阳性组（1.01±0.04）%；实验组（1.05±0.08）%），且实验组增长趋势更优，后期趋近正常组（（1.11±0.15）%），证实该干预措施能有效改善酒精性肝损伤导致的体质量降低。
图4 慢性酒精性肝损伤模型小鼠的体质量变化率曲线
Fig.4 Curves of body weight change rates in mouse model of chronic alcoholic liver injury
2.5.2 解酒泡腾片对慢性酒精性肝损伤小鼠血清指标的影响
乙醇可诱导肝脏产生炎症、加重肝脏损伤，促使更多的AST、ALT进入血液，导致血液中AST、ALT活性升高[19]。如表7所示，与正常组比较，模型组ALT、AST活性均显著升高（P＜0.001），说明长期摄取乙醇可引起肝脏损伤。与模型组比较，实验组及阳性对照组均能显著降低醉酒小鼠血清中AST及ALT活性（P＜0.01），且实验组与正常组比较无显著差异（P＞0.05），说明解酒泡腾片可有效预防乙醇引起的酒精性肝损伤。
表7 解酒泡腾片对小鼠血清ALT、AST活性及TC、TG浓度的影响
Table7 Effects of anti-hangover effervescent tablets on serum ALT and AST activities and total cholesterol and TG concentrations in mice
组别ALT活性/（U/L）AST活性/（U/L）TG浓度/（mmol/L）TC浓度/（mmol/L）正常组10.52±3.5811.79±5.624.89±1.058.79±1.87模型组36.58±7.63***51.49±6.98***8.31±1.75***12.06±2.77阳性对照组16.13±4.15△△*13.67±3.86△△*6.36±0.86△△10.05±2.67单独给药组11.91±4.12△△11.67±4.52△△4.93±0.99△△#9.00±1.73实验组14.47±4.45△△12.33±3.74△△4.99±0.90△△#9.44±2.33
注：与正常组比较，*. P＜0.05，***. P＜0.001；与模型组比较，△△. P＜0.01；与阳性组比较，#. P＜0.05。表8同。
血清TG、TC水平可提示肝细胞脂肪堆积的异常程度。如表7所示，模型组小鼠TG水平显著高于正常组（P＜0.001），说明乙醇诱导肝脂质积累模型建立成功。阳性对照组、单独给药组、实验组血清TG水平均显著低于模型组（P＜0.01），且实验组TG水平优于阳性对照组（P＜0.05），提示该泡腾片可有效逆转乙醇所致肝组织TG升高，改善脂质代谢，其机制可能与促进脂质分解、抑制脂质合成或增强肝脏抗氧化能力相关。血清TC水平虽有波动，但无统计学差异。
2.5.3 解酒泡腾片对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏指标的影响
乙醇诱发肝细胞氧化损伤时，活性氧自由基大量生成将诱发脂质过氧化，破坏膜完整性与功能，促使终产物MDA水平升高，同时，持续性激活的氧化应激会加速GSH消耗并导致SOD活性下降。基于上述机制，肝组织中MDA含量、GSH含量及SOD活性可作为量化肝细胞氧化损伤程度的关键指标[20-21]。如表8所示，阳性组和实验组均表现出极强的ADH活性，显著高于模型组（P＜ 0.001），其可通过加速乙醇代谢发挥解酒作用；与正常组相比，模型组肝组织中SOD活性、GSH含量显著降低，MDA含量显著升高（P＜0.01、P＜0.001），说明长期乙醇摄入成功诱导肝损伤。与模型组相比，阳性对照组和实验组小鼠肝脏中SOD活性及GSH含量均显著升高（P＜0.01、P＜0.001），MDA含量显著降低（P＜0.01），其中实验组显著优于阳性对照组（P＜0.05、P＜0.01、P＜0.001），表明该解酒泡腾片可显著增强内源性抗氧化活性，抑制自由基介导的脂质过氧化，有效缓解乙醇所致肝细胞氧化应激损伤。报道显示，枳椇子的黄酮类成分可通过激活ADH加速乙醇代谢，并抑制脂质过氧化[22-23]；葛根的葛根素可通过磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B信号通路增强机体抗氧化能力，降低TNF-α等炎症因子水平，减少肝细胞凋亡[24-25]；桑葚多糖可有效清除自由基，调节GSH平衡，缓解氧化应激[26-27]。以上均提示，解酒泡腾片可能形成“代谢-抗氧化-抗炎”三重保护网络，发挥解酒与护肝功效。
表8 解酒泡腾片对小鼠肝脏SOD、ADH活性和MDA、GSH含量的影响
Table8 Effects of anti-inebriation effervescent tablets on SOD and ADH activities and MDA and GSH contents in mouse liver
组别ADH活性/（U/mg）SOD活性/（U/mg）GSH含量/（mmol/mg）MDA含量/（nmol/mg）正常组18.46±4.19135.6±14.34.54±0.993.49±1.65模型组18.03±2.1531.1±1.3***2.23±0.28**24.64±4.24***阳性对照组49.10±2.00△△△81.0±8.4△△△3.03±0.14△△13.76±1.03△△单独给药组45.09±4.25△△△126.1±20.8△△△###4.45±1.02△△△###2.82±1.00△△###实验组45.21±4.30△△△141.6±19.5△△△###3.55±0.54△△△#7.07±4.63△△##
注：与正常组比较，**. P＜0.01；与模型组比较，△△△. P＜0.001；与阳性组比较，##. P＜0.01，###. P＜0.001。
2.5.4 解酒泡腾片对慢性酒精性肝损伤小鼠肝脏病理 组织变化的影响
本研究构建的慢性酒精性肝损伤模型以肝细胞脂肪空泡形成、轻度炎症及血清ALT、AST、TG水平升高为特征，符合早期轻症ALD的病理表现[28]。肝脏HE染色结果如图5A所示，正常组与单独给药组肝小叶结构清晰，肝细胞排列规整，无明显病理损伤，提示解酒泡腾片长期干预对肝脏无不良影响；模型组小鼠肝脏结构混乱，肝细胞排列紊乱，40倍镜下可见肝细胞肿胀、脂肪变性、坏死及炎症浸润，表明长期灌胃乙醇成功诱导小鼠肝损伤。阳性对照组肝组织病理改变轻微，实验组肝小叶结构近乎正常，肝细胞围绕中央静脉呈条索状规则排列，无明显变性坏死及炎症浸润，表明该泡腾片可显著修复酒精性肝损伤。过量摄入乙醇引起肝细胞膜磷脂过氧化反应，产生过量脂自由基，引起肝脏脂肪酸β-氧化过程受损，TG代谢紊乱，出现脂肪堆积[29]。肝脏油红O染色结果如图5B所示，正常组肝细胞内脂滴散且少；模型组肝细胞内充满大量红色大脂滴；实验组脂滴数量显著减少且体积缩小，证实该解酒泡腾片能有效改善肝细胞脂肪堆积，对酒精性肝损伤具有显著保护作用。
图5 小鼠肝组织HE染色（A）与油红O染色（B）病理切片
Fig.5 Pathological sections of mouse liver tissue with hematoxylin-eosin staining (A) and oil red O staining (B)
3 结 论
本研究以药食同源的枳椇子、葛根、桑葚提取物为原料，首先筛选确定三者最佳配伍比例为12∶18∶70，通过正交试验优化得到泡腾片最优制备工艺（崩解剂60%、酸碱比0.6∶1、甜菊糖4%），成品崩解时限（95.00±1.29）s、产气量（0.156 9±0.005 0）g及pH值（6.35±0.13）均符合泡腾片质量规范，感官评分（4.260±0.051）分，品质优良；最佳ABTS阳离子自由基、DPPH自由基清除率分别为98.81%、86.35%，表明该泡腾片具有良好抗氧化活性；动物实验表明，其可显著延长急性醉酒小鼠耐受时间、缩短醉酒时长，同时改善慢性酒精性肝损伤小鼠体质量下降趋势，下调血清ALT、AST活性及TG水平，提升肝组织SOD活性与GSH含量，降低MDA蓄积；肝组织HE及油红O染色结果显示，其能有效修复肝细胞脂肪变性与炎症浸润，恢复肝小叶结构完整性。本研究创新性实现了枳椇子-葛根-桑葚三元活性成分的协同增效，所制备泡腾片兼具实用性与适口性，为天然解酒保肝产品的研发与产业化应用提供了理论依据实验。
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