浆水是我国西北地区民间广泛流传的一种传统发酵食品[1]，富含乳酸菌、VC及多种有机酸，具有开胃止渴、调理脏腑、降血压等保健作用[2-3]。乳酸菌是浆水发酵的核心微生物，直接决定浆水风味与品质[4]。已有研究从不同地区浆水中分离到多种乳酸菌，菌群组成较为一致，主要包括戊糖乳杆菌（Lactobacillus pentosus）、发酵乳杆菌（Limosilactobacillus fermentum）、植物乳植杆菌（Lactiplantibacillus plantarum）、短乳杆菌（Lactobacillus brevis）、副干酪乳杆菌（Lacticaseibacillus paracasei）等[5-6]。乳酸菌在生长过程中可产生细菌素、胞外多糖、γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid，GABA）、短链脂肪酸等活性物质，具有抑菌[7]、调节肠道屏障[8]和提升免疫力[9]等多种功能，广泛应用于食品发酵与保鲜、饲料和益生制剂等领域[10-11]。研究发现，来源于浆水的高产GABA L. plantarum LZU-J-TSL6和具有降尿酸能力的L. fermentum JL-3表现出明显的益生活性[12-13]。
汉中浆水主要采用当地特色花辣菜发酵而成，制作的菜豆腐、浆水面、浆水炒饭等传统美食深受当地人喜爱。汉中位于秦岭与巴山之间，气候温和湿润，使浆水具有独特的风味和微生物组成[14]。前期研究表明，汉中浆水中的优势菌属主要包括乳植杆菌属（Lactiplantibacillus）、腐败乳杆菌属（Loigolactobacillus）、魏斯氏菌属（Weissella）、寡碳乳杆菌属（Paucilactobacillus）、明串珠菌属（Leuconostoc）等[15]。因此，汉中浆水是分离地域特色乳酸菌的优质资源库。
本研究采用梯度稀释涂布法从汉中浆水中分离乳酸菌菌株，采用形态学和分子生物学技术进行种属鉴定。通过检测生长能力和产酸能力明确其发酵特性，并通过体外实验综合评价菌株的胃肠道环境耐受能力、细胞表面特性、益生特性和安全性，以期为功能乳酸菌资源的开发和应用奠定理论基础。
1 材料与方法
1.1 菌株、材料与试剂
大肠杆菌（Escherichia coli）ATCC 25922、E. coli K88、单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）CICC 21635、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）CMCC(B)26003、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC(B)63501 本实验室。
新鲜花辣菜采购于当地蔬菜市场；发酵引子为当地农家自制浆水。
强力土壤DNA提取试剂盒 美国MO Bio Laboratories公司；Monarch DNA胶回收试剂盒 美国NEB公司；细菌基因组DNA纯化试剂盒 北京全式金生物技术股份有限公司；2×Taq Master Mix 上海笛医生物科技有限公司；抗生素纸片 杭州微生物试剂有限公司；MRS肉汤培养基、MRS琼脂培养基、MHB培养基、哥伦比亚CNA血琼脂平板 青岛海博生物技术有限公司；牛胆盐、胃蛋白酶、胰蛋白酶、GABA标准品北京索莱宝科技有限公司。本研究所用试剂均为分析纯或生化试剂。
1.2 仪器与设备
DFC450C数码彩色显微系统、DM1000聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）仪 德国Leica公司；NanoDrop 2000核酸测定仪 美国Thermo Fisher Scientific公司；Infinite 200PRO酶标仪 瑞士Tecan公司；GL-22M高速冷冻离心机 上海卢湘仪离心机仪器有限公司；1260高效液相色谱仪 美国Agilent公司。
1.3 方法
1.3.1 样品采集与处理
取新鲜花辣菜5 kg，清水洗净，控干水分，开水烫菜后捞出晾凉控水，放入坛中，添加10 L含0.5 g/100 mL面粉的面汤和200 mL发酵引子，密封后置于阴凉通风处自然发酵，每天打开瓦罐上下翻动一次，观察发酵状态，分别在发酵1、5、10 d取样，于超净工作台中用纱布将浆水样品过滤2次以除去粗渣，保存备用。
1.3.2 乳酸菌菌株分离纯化
将处理好的样品按10倍系列梯度稀释至10-5，分别取稀释度为10-3、10-4、10-5的稀释液100 μL涂布至含有1 g/100 mL CaCO3的MRS琼脂培养基上，37 ℃培养24 h。挑取能够产生溶钙圈的单菌落，在含有1 g/100 mL CaCO3的MRS培养基上多次划线纯化，挑取纯化后的单菌落于MRS液体培养基中，37 ℃静置培养24 h，添加终体积分数15%甘油保藏于-80 ℃冰箱。将发酵1、5、10 d分离获得的菌株分别编号为1、2、3。
1.3.3 乳酸菌菌株鉴定
形态学鉴定：观察纯化后单菌落的颜色、大小、边缘形态，并进行革兰氏染色，采用显微镜观察菌体形态及革兰氏染色结果。
分子生物学鉴定：采用强力土壤DNA提取试剂盒提取保藏菌株基因组DNA，以其为模板，采用16S rRNA通用引物27F（5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′）和1429R（5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′）对菌株16S rRNA基因序列进行PCR扩增。PCR扩增体系：20 μL 2×Mix、200 ng基因组DNA、2 μL引物27F（10 μmol/L）、 2 μL引物1429R（10 μmol/L），双蒸水（ddH2O）补至40 μL。PCR扩增程序：95 ℃预变性5 min，循环30次（95 ℃变性1 min，50 ℃退火1 min，72 ℃延伸90 s），72 ℃再延伸10 min。PCR扩增产物经细菌基因组DNA纯化试剂盒纯化后送至北京擎科生物科技股份有限公司进行测序。将测序结果提交至NCBI的GenBank数据库中，采用BLAST进行同源性比对分析[1]，采用MEGA 12软件分析，通过邻接法构建系统发育树。
1.3.4 生长曲线及产酸曲线测定
将活化后的菌株以1%（V/V）的接种量接种至MRS液体培养基，于37 ℃静置培养，监测28 h内菌液OD600 nm值 及52 h内菌液pH值变化，以培养时间为横坐标，分别以OD600 nm值与pH值为纵坐标绘制生长曲线及产酸曲线。
1.3.5 乳酸菌对胃肠道环境耐受能力评价
参考文献[16-17]的方法考察菌株对0.3 g/100 mL胆盐及模拟胃肠液的耐受能力。
1.3.6 乳酸菌细胞表面特性评价
参考文献[18-19]的方法考察菌株的疏水性和聚集能力，以E. coli ATCC 25922、E. coli K88、L. monocytogenes CICC 21635和S. aureus CMCC(B)26003为指示菌，测定菌株的表面疏水率、自聚集率和共聚集率。
1.3.7 乳酸菌益生特性评价
以E. coli ATCC 25922、S. aureus CMCC(B)26003和B. subtilis CMCC(B)63501为指示菌，根据Choi等[20]的方法测定菌株的抑菌能力。参考文献[21-22]的方法测定菌株的亚硝酸盐降解能力及产GABA能力。
1.3.8 乳酸菌安全性鉴定
参考文献[23-24]的方法考察菌株的溶血性及抗生素敏感性。
1.4 数据处理
所有实验平行3次，采用SPSS 27软件处理数据并进行方差分析，采用GraphPad Prism 8软件绘图。
2 结果与分析
2.1 乳酸菌的分离纯化与鉴定
2.1.1 乳酸菌的分离及形态学特征
从含有1 g/100 mL CaCO3的MRS培养基上挑取具有溶钙圈的单菌落进行多次划线纯化，共分离得到11株产酸菌株，其编号及形态学特征见表1。11株菌株的菌落多为白色或淡黄色，菌落表面光滑湿润，有光泽和凸起，呈半透明或不透明状态，边缘完整，呈规则的圆形。11株菌株均为革兰氏阳性菌（G+），单菌形态为短杆状和链球状。综上，初步鉴定这11株菌株为乳酸菌。
表1 分离乳酸菌菌株的菌落及细胞形态特征
Table1 Colonial and cellular morphological characteristics of isolated LAB strains
表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+链球状表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+链球状表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+链球状菌株编号菌落形态染色结果细胞形态1-1白色，圆形，不透明，凸起，1-2白色，圆形，不透明，凸起，表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状2-1淡黄色，圆形，不透明，凸起，2-3白色，圆形，半透明，凸起，表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+链球状3-2白色，圆形，半透明，凸起，3-6白色，圆形，不透明，凸起，3-7灰白色，圆形，半透明，凸起，3-10白色，圆形，不透明，凸起，3-11白色，圆形，不透明，凸起，表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状3-13白色，圆形，半透明，凸起，3-16白色，圆形，半透明，凸起，表面光滑湿润，有光泽，边缘完整G+短杆状
2.1.2 分子生物学鉴定
为明确上述11株菌的具体种属，对其16S rRNA进行测序。结果显示，菌株3-2、3-7、3-10和3-16的测序峰图存在双峰，菌株纯化不充分，未能获得准确序列。因此，基于16S rRNA基因序列仅对完全纯化的7株 菌构建系统发育树，结果见图1。菌株1-1、1-2、3-6和3-11为Weissella的不同种，其中菌株1-1为Weissella ceti，菌株1-2为Weissella muntiaci，菌株3-6和3-11均为Weissella diestrammenae。菌株2-1为L. plantarum，菌株2-3为L. brevis，菌株3-13为荔枝明串珠菌（Leuconostoc litchii）。已有研究表明，浆水中乳酸菌种类较为丰富，且L. plantarum的检出率较高。吴燕等[25]从甘肃浆水中获得2株可产蛋白类抑菌物质的菌株，鉴定为L. fermentum和L. plantarum。胡莹莹等[26]研究发现，芹菜浆水发酵过程中的微生物以L. plantarum、L. fermentum、L. brevis和乳酸片球菌（Pediococcus acidilactici）为主要优势菌群。本研究结果与上述文献报道一致，表明L. plantarum在不同来源浆水中点据重要地位，是维持浆水发酵过程中品质稳定的关键菌种之一。
图1 基于16S rRNA基因序列的乳酸菌菌株系统发育树
Fig.1 Phylogenetic tree of LAB strains based on 16S rRNA gene sequences
2.2 乳酸菌生长及产酸能力
选择Weissella的代表菌株1-1（W. ceti）及2-1 （L. plantarum）、2-3（L. brevis）和3-13（L. litchii）进行生长能力和产酸能力检测。由图2A可知，菌株1-1和3-13迟滞期较短，培养2 h进入对数生长期，培养7 h达到稳定期，但菌体密度较低，7 h时OD600 nm值分别为2.22和1.59。菌株2-3生长较缓，5 h进入对数期，20 h达到稳定期，20 h时OD600 nm值为3.59。菌株2-1 5 h进入对数期，16 h达到稳定期，16 h时OD600 nm值为4.29。由图2B可知，pH值变化与生长曲线一致，菌株1-1、2-1和3-13均能在培养8 h内将pH值降至约4.50，然而菌株2-3需要培养20 h。在稳定期，菌株1-1和2-3的pH值维持在4.5左右，菌株2-1和3-13的pH值更低，分别为3.8左右和4.0左右。综上所述，菌株1-1和3-13生长迅速但密度低，菌株2-3生长缓慢但稳定期菌体密度高，菌株2-1兼具优良的生长能力和高产酸能力，且菌株2-1、2-3具有高密度培养潜力。乳酸菌的生长和产酸能力是评价其发酵性能的重要指标，快速生长有利于其在发酵体系中迅速点据优势地位，而快速产酸能够有效降低体系pH值，从而抑制腐败菌生长[27]。崔棹茗等[28]从青贮饲料中分离的同型发酵乳酸菌，其稳定期OD600 nm值均大于2.00，且部分菌株可在20 h内将pH值降至4.00以下，与本研究的结果具有一致性。
图2 乳酸菌菌株的生长曲线（A）与产酸曲线（B）
Fig.2 Growth curves (A) and acid production curves (B) of LAB strains
2.3 乳酸菌对胃、肠道环境的耐受能力
由表2可知，在0.3 g/100 mL牛胆盐环境中处理2 h后，4株乳酸菌菌株整体耐受性较弱，仅菌株3-13的存活率大于10%，菌株2-3的存活率小于5%，菌株1-1和2-1几乎无法存活，说明来源于无盐发酵蔬菜的菌株可能缺乏适应高胆盐环境能力。
表2 乳酸菌菌株在0.3 g/100 mL胆盐环境中的活菌数与存活率
Table2 Viable counts and survival rates of LAB strains under 0.3 g/100 mL bile salt condition
菌株编号活菌数/（CFU/mL）存活率/%0 h2 h 1-11.24×10102.70×1040.00±0.00 c 2-11.25×1097.33×1040.01±0.00 c 2-31.60×1084.00×1062.50±0.05b 3-132.56×1073.74×10614.83±1.05a
注：同列小写字母不同表示差异显著（P＜0.05）。表3、4同。
由表3可知，在模拟胃液（pH 2.0）中，各菌株存活率也普遍较低，存活率最高的为菌株2-3（40.84%）。进入模拟肠液后，各菌株的生长恢复状况差异明显。其中，菌株2-1恢复能力最强，在处理3 h后存活率升至173.72%。菌株3-13存活率在模拟肠液处理6 h后增至209.38%。在模拟胃液pH 3.0条件下，菌株2-1与2-3耐受性更为突出，3 h存活率均大于100%，进入模拟肠液6 h后，存活率均大于200%。相比之下，菌株1-1与3-13在pH 3.0模拟胃液中的耐受性较弱，但进入模拟肠液后仍能恢复并显著增殖，6 h时存活率分别达671.43%和537.93%。综合菌株在0.3 g/100 mL牛胆盐、模拟胃液及肠液处理后的存活率结果，菌株2-1和2-3对胃肠道环境耐受性较强。
表3 乳酸菌菌株在模拟胃肠液中的存活率
Table3 Survival rates of LAB strains in simulated gastric and intestinal fluids
%模拟胃液菌株（pH 2.0）模拟肠液（pH 6.8）模拟胃液（pH 3.0）模拟肠液（pH 6.8）编号3 h3 h6 h3 h3 h6 h 1-11.28±0.01d32.65±0.51d45.34±2.67d0.95±0.01c109.52±1.86c671.43±9.86a 2-118.91±0.48c173.72±2.60a244.06±3.50a143.75±5.55a182.19±2.92a205.48±1.50c 2-340.84±0.55a98.94±0.94b85.69±0.63c141.33±6.08a94.00±4.06d220.00±8.93c 3-1336.12±0.47b37.93±1.90c209.38±1.03b77.88±1.53b171.91±12.92b537.93±7.75b
益生菌在肠道中发挥作用需要具备较高的存活率与定植能力，通常认为至少应维持106～107 CFU/g的浓度[29]，其定植能力与耐受胃肠环境及黏附性能密切相关[30-31]。刘爱瑜等[24]研究发现，不同乳酸菌在胃液和肠液中的存活率差异显著，为5.26%～175.6%。与之相比，本研究菌株在pH 2.0胃液中的存活率偏低，但在pH 3.0条件下进入肠液后能够迅速恢复增殖，提示其可能更适应食品经初步消化后接近实际肠道pH值的环境。
2.4 乳酸菌细胞表面特性
肠道定植能力是益生菌的重要特性[32]。乳酸菌细胞表面的疏水性、自聚集性及与病原菌的共聚集性均与肠道黏附能力密切相关，可促进其在肠道内定植并阻断病原菌附着[20,33]。由表4可知，菌株1-1细胞表面疏水率最高（93.31%），其次为菌株2-1（60.45%），均显著高于菌株2-3和3-13（P＜0.05）。菌株2-1的自聚集率（49.82%）显著高于其他3株菌株（P＜0.05）。菌株2-1与S. aureus CMCC(B)26003、L. monocytogenes CICC 21635的共聚集率最高，分别为53.51%和43.89%。菌株3-13与S. aureus CMCC(B)26003的共聚集率也较高，为40.99%。菌株1-1和2-3与4种致病菌的共聚集率均小于40%。研究发现，菌株自聚集率越高，其黏附能力越强[34]，与致病菌的共聚集能力越强，越有利于其竞争性黏附肠道上皮细胞[35]。本研究中，菌株2-1在疏水性、自聚集和共聚集3个指标上均表现较强，而菌株1-1具有最高的细胞表面疏水率，提示二者具备较好的肠道黏附潜力。
表4 乳酸菌菌株细胞表面疏水性、自聚集率和致病菌共聚集率
Table4 Cell surface hydrophobicity, auto-aggregation rate and pathogen co-aggregation rate of LAB strains
25922K88CICC 216352-160.45±1.38b49.82±1.97a30.83±1.34a30.97±1.37a53.51±2.11a43.89±0.97a 2-350.25±2.25c12.83±0.99c14.58±1.02c16.01±0.15c26.88±1.06c1.60±0.26c共聚集率/%菌株表面自聚编号疏水率/%集率/%E. coli ATCC E. coliS. aureusL. monocytogenes CMCC(B)260031-193.31±1.90a30.45±1.45b18.41±0.80b26.58±0.63b37.71±0.19b23.35±1.73b 3-1324.00±0.70d35.26±2.50b20.65±0.94b16.25±0.49c40.99±1.20b25.79±0.80b
2.5 乳酸菌益生特性
乳酸菌可通过有机酸、细菌素、过氧化氢等代谢物抑制病原菌，其机制包括破坏细胞膜、干扰代谢或竞争受体位点以阻止定植[26]。由图3A～C可知，菌株2-1的无细胞上清液在培养12 h内对E. coli ATCC 25922、 S. aureus CMCC(B)26003和B. subtilis CMCC(B)63501的抑菌率均大于78%，且24 h后仍保持较强抑菌活性，其他菌株抑菌效果较弱，提示菌株2-1的无细胞上清液具有较强的抗菌活性。乳酸菌的抗菌活性、亚硝酸盐降解和代谢产物生成是其食品防腐与益生作用的重要基 础[36-37]。本研究中菌株对病原菌抑制率随时间延长而下降，可能与其抑菌物质的稳定性有关。由图3D可知，4株乳酸菌在培养24 h内对添加的125 mg/L NaNO2降解率均大于65%。其中菌株2-1和2-3的降解能力较强，接近100%，显著高于菌株1-1和3-13（P＜0.05）。已有研究显示，多株L. plantarum可在24 h内实现高于99%的亚硝酸盐降解[38-39]，与本研究中菌株2-1的结果一致。由图3E可知，在含10 g/L L-谷氨酸的培养基中，菌株2-3在48 h内生成4.63 g/L GABA，底物利用率达97.68%。不同菌株GABA产量差异显著，但均可通过优化发酵条件提高其产量[40-42]。本研究中，菌株2-3表现出较高的产GABA能力和应用开发潜力，具有进一步开发的价值。综上，4株乳酸菌均具备一定益生特性，其中菌株2-1在抑菌活性和亚硝酸盐降解方面表现最优，菌株2-3在亚硝酸盐降解和GABA生成方面具有突出优势，值得作为潜在功能菌株进一步研究。
图3 乳酸菌菌株益生特性评价
Fig.3 Evaluation of probiotic properties of LAB strains
2.6 乳酸菌安全性
由图4可知，菌株1-1、2-1和3-13均为α-溶血性，菌株2-3为γ-溶血性，说明4株乳酸菌菌株均表现出非β-溶血性，具有较好的安全性。
图4 乳酸菌菌株的溶血活性
Fig.4 Hemolytic activity of LAB strains
益生菌的重要安全标准之一是不携带可转移抗性基因，因此需对其抗生素敏感性进行评估[43]。本研究对4株菌进行7类共14种抗生素的敏感性检测，结果见表5。所有菌株均对卡那霉素、诺氟沙星、万古霉素和磺胺异恶唑耐药。菌株1-1、2-1和2-3对环丙沙星耐药，菌株3-13为中度敏感。菌株2-3对恩诺沙星耐药，菌株1-1、2-1和3-13为中度敏感。此外，菌株2-3和3-13对头孢噻肟表现中度敏感。总体来看，4株乳酸菌菌株的耐药谱较为相似，主要对氨基糖苷类、喹诺酮类、糖肽类及磺胺类抗生素具有一定耐受性。这与此前相关研究[24,44]结果相似。结合其非β-溶血性特征，4株乳酸菌菌株具有较好的安全性，适合作为益生菌候选菌株。
表5 乳酸菌菌株的抗生素敏感性
Table5 Antibiotic susceptibility of LAB strains
抗生素菌株1-1菌株2-1菌株2-3菌株3-13青霉素SSSS氨苄西林SSSSβ-内酰胺类阿莫西林SSSS头孢噻肟SSII卡那霉素RRRR氨基糖苷类庆大霉素SSSS大环内酯类红霉素SSSS四环素SSSS四环素类米诺环素SSSS环丙沙星RRRI喹诺酮类诺氟沙星RRRR恩诺沙星IIRI糖肽类万古霉素RRRR磺胺类磺胺异恶唑RRRR
注：R.耐药；I.中度敏感；S.敏感。
3 结 论
本研究从汉中地区传统发酵食品浆水中共分离获得7株乳酸菌，经鉴定菌株1-1、1-2、3-6和3-11为Weissella的不同种，菌株2-1为L. plantarum，菌株2-3为L. brevis，菌株3-13为L. litchii。选择菌株1-1、2-1、2-3和3-13进行体外益生特性评价。结果表明，菌株2-1生长能力及产酸能力较强。菌株2-1和2-3对模拟胃、肠液环境耐受性良好。菌株1-1和2-1细胞表面疏水率较高；菌株2-1自聚集率最高（49.82%），与S. aureus和 L. monocytogenes共聚集率最高，分别为53.51%和43.89%；菌株3-13与S. aureus共聚集率为40.99%。菌株2-1发酵12 h无细胞上清液对E. coli、S. aureus及 B. subtilis抑制率均大于78%；菌株2-1和2-3的亚硝酸盐降解率接近100%；菌株2-3的GABA产量最高，达4.63 g/L。4株菌株均为非β-溶血性，安全性较好。综上，汉中浆水中分离得到的乳酸菌具有较好的体外益生潜力，其中L. plantarum 2-1和L. brevis 2-3表现最为突出，可作为潜在益生菌株，为传统发酵食品乳酸菌资源的开发与利用提供了科学依据。
[1] 赵海霞, 吴丹, 王晓蕾, 等. 降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选及其在菜用枸杞浆水发酵中的应用[J]. 中国酿造, 2022, 41(11): 113-119. DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2022.11.020.
[2] 张哲川, 梁晓琳, 张玉双, 等. 浆水发酵过程中有机酸的变化及其抑菌性能和体外抗氧化能力[J]. 中国食品学报, 2024, 24(4): 159-169.DOI:10.16429/j.1009-7848.2024.04.016.
[3] 蔡苗苗, 贠建民, 何大星, 等. 甘肃传统浆水发酵过程中产双戊烯乳酸菌的分离筛选[J]. 食品工业科技, 2018, 39(19): 109-113.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2018.19.019.
[4] 李欣, 武俊瑞, 田甜, 等. 大庆自然发酵酸菜中乳酸菌的分离鉴定及耐酸菌株初步筛选[J]. 食品科学, 2014, 35(1): 150-154.DOI:10.7506/spkx1002-6630-201401029.
[5] 武帅帅, 冯云霄, 康倩, 等. 不同地区浆水菜中可培养乳酸菌的组成分析[J]. 基因组学与应用生物学, 2017, 36(3): 952-959.DOI:10.13417/j.gab.036.000952.
[6] 张勇, 吕嘉枥, 闫亚梅, 等. 传统发酵浆水中乳酸菌和酵母菌的分离与鉴定[J]. 中国食品学报, 2017, 17(6): 179-186. DOI:10.16429/j.1009-7848.2017.06.024.
[7] Hai Dan, Kong Liangyu, Lu Zhaoxin, et al. Inhibitory effect of different chicken-derived lactic acid bacteria isolates on drug resistant Salmonella SE47 isolated from eggs[J]. Letters in Applied Microbiology, 2021, 73(1): 54-63. DOI:10.1111/lam.13475.
[8] Watanabe-Yasuoka Y, Gotou A, Shimizu S, et al. Lactiplantibacillus plantarum OLL2712 induces autophagy via MYD88 and strengthens tight junction integrity to promote the barrier function in intestinal epithelial cells[J]. Nutrients, 2023, 15(12): 2655. DOI:10.3390/nu15122655.
[9] Naveed U, Jiang Chenxi, Yan Qingsong, et al. Inhibitory effect of Lactococcus and Enterococcus faecalis on citrobacter colitis in mice[J]. Microorganisms, 2024, 12(4): 730. DOI:10.3390/microorganisms12040730.
[10] 尹树磊, 杜香, 张小希, 等. 乳酸菌抗氧化机制研究进展及在食品领域的应用[J]. 食品科学, 2024, 45(13): 345-355. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20230911-080.
[11] 李杨, 杨燕, 王振南, 等. 乳酸菌在畜禽营养与饲料中的应用[J]. 饲料工业, 2024, 45(5): 16-22. DOI:10.13302/j.cnki.fi.2024.05.003.
[12] Liu Guanlan, Khan I, Li Yuxi, et al. Overcoming anxiety disorder by probiotic Lactiplantibacillus plantarum LZU-J-TSL6 through regulating intestinal homeostasis[J]. Foods, 2022, 11(22): 3596.DOI:10.3390/foods11223596.
[13] Wu Ying, Ye Ze, Feng Pengya, et al. Limosilactobacillus fermentum JL-3 isolated from “Jiangshui” ameliorates hyperuricemia by degrading uric acid[J]. Gut Microbes, 2021, 13(1): 1-18. DOI:10.1080/19490976.2021.1897211.
[14] 支树林, 许东蓓, 潘赫拉, 等. 陕西汉中及其周边地区对流活动的雷达气候特征分析[J]. 干旱气象, 2021, 39(4): 620-630. DOI:10.11755/j.issn.1006-7639(2021)-04-0620.
[15] 刘阳, 王珊珊, 高琪, 等. 汉中地区浆水发酵过程中微生物群落演替及其功能预测[J]. 中国酿造, 2023, 42(10): 142-149. DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2023.10.022.
[16] 聂紫玉, 吴艳阳, 王增光, 等. 植物源益生乳酸菌的筛选及其特性[J].食品科学, 2022, 43(18): 143-151. DOI:10.7506/spkx1002-6630-20211018-189.
[17] 郑越, 段涛, 宋丹, 等. 六株植物乳杆菌的益生特性研究[J]. 食品与发酵工业, 2022, 48(10): 119-125. DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.029063.
[18] Liu Chen, Xue Wenjiao, Ding Hao, et al. Probiotic potential of Lactobacillus strains isolated from fermented vegetables in Shaanxi,China[J]. Frontiers in Microbiology, 2021, 12: 774903. DOI:10.3389/fmicb.2021.774903.
[19] 史梅莓, 伍亚龙, 杨恺, 等. 四川泡菜中潜在益生性植物乳杆菌的筛选及安全性评价[J]. 食品工业科技, 2022, 43(22): 165-172.DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2022010227.
[20] Choi A R, Patra J K, Kim W J, et al. Antagonistic activities and probiotic potential of lactic acid bacteria derived from a plantbased fermented food[J]. Frontiers in Microbiology, 2018, 9: 1963. DOI:10.3389/fmicb.2018.01963.
[21] 陈正培, 蒋潮, 夏娴润, 等. 柳州酸笋中降亚硝酸盐乳酸菌的筛选及鉴定[J]. 中国酿造, 2020, 39(3): 26-31. DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2020.03.006.
[22] 马莉, 刘慧燕, 方海田, 等. 产γ-氨基丁酸乳酸菌的分离鉴定及其发酵条件优化[J]. 中国酿造, 2022, 41(7): 94-100. DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2022.07.017.
[23] 吴鹏宇, 单乾铜, 娄娅娟, 等. 洛阳传统酸浆中乳酸菌分离鉴定及菌种性能测定[J]. 中国酿造, 2025, 44(6): 130-140. DOI:10.11882/j.issn.0254-5071.2025.06.019.
[24] 刘爱瑜, 田军, 赵心念, 等. 育肥绵羊胃肠道乳酸菌的分离鉴定及部分体外益生特性评价[J]. 动物营养学报, 2022, 34(12): 8149-8160.DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2022.12.061.
[25] 吴燕, 伏二伟, 桑学财, 等. 传统浆水中乳酸菌的筛选及抑菌性能分析[J]. 食品研究与开发, 2019, 40(22): 42-48. DOI:10.12161/j.issn.1005-6521.2019.22.008.
[26] 胡莹莹, 赵丽, 史力学, 等. 浆水发酵中的优势乳酸菌分离鉴定[J]. 甘肃农业科技, 2021, 52(4): 43-48. DOI:10.3969/j.issn.1001-1463.2021.04.011.
[27] 韦庆旭, 张建鹏, 梁煜晨, 等. 青贮用乳酸菌的分离鉴定及生物学特性评价[J]. 动物营养学报, 2022, 34(7): 4737-4749. DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2022.07.060.
[28] 崔棹茗, 郭刚, 原现军, 等. 青稞秸秆青贮饲料中优良乳酸菌的筛选及鉴定[J]. 草地学报, 2015, 23(3): 607-615. DOI:10.11733/j.issn.1007-0435.2015.03.025.
[29] Chávarri M, Marañón I, Ares R, et al. Microencapsulation of a probiotic and prebiotic in alginate-chitosan capsules improves survival in simulated gastro-intestinal conditions[J]. International Journal of Food Microbiology, 2010, 142(1/2): 185-189. DOI:10.1016/j.ijfoodmicro.2010.06.022.
[30] Duary R K, Rajput Y S, Batish V K, et al. Assessing the adhesion of putative indigenous probiotic lactobacilli to human colonic epithelial cells[J]. Indian Journal of Medical Research, 2011, 134(5): 664-671. DOI:10.4103/0971-5916.90992.
[31] Solieri L, Bianchi A, Mottolese G, et al. Tailoring the probiotic potential of non-starter Lactobacillus strains from ripened Parmigiano Reggiano cheese by in vitro screening and principal component analysis[J]. Frontiers in Microbiology, 2014, 38: 240-249. DOI:10.1016/j.fm.2013.10.003.
[32] Nami Y, Bakhshayesh R V, Jalaly H M, et al. Probiotic properties of Enterococcus isolated from artisanal dairy products[J]. Frontiers in Microbiology, 2019, 10: 300. DOI:10.3389/fmicb.2019.00300.
[33] 张晓旭, 刘欢, 肖苗, 等. 益生菌代谢产物对病原菌的抑菌作用研究进展[J]. 食品与发酵工业, 2023, 49(8): 297-302. DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.032474.
[34] 董宏杰, 苏馨, 范琪琪, 等. 人源双歧杆菌分离鉴定及潜在益生菌筛选[J]. 中国微生态学杂志, 2025, 37(5): 532-540,549. DOI:10.13381/j.cnki.cjm.202505006.
[35] 许文杰, 李盛钰, 赵玉娟, 等. 我国传统发酵制品来源乳杆菌黏附相关表面特性研究[J]. 中国乳品工业, 2012, 40(6): 15-18.DOI:10.3969/j.issn.1001-2230.2012.06.004.
[36] Zhang Xiazhu, Han Jiarun, Zheng Xiaogu, et al. Use of Lactiplantibacillus plantarum ZJ316 as a starter culture for nitrite degradation, foodborne pathogens inhibition and microbial community modulation in pickled mustard fermentation[J]. Food Chemistry: X,2022, 14: 100344. DOI:10.1016/j.fochx.2022.100344.
[37] 何双, 尚雪波, 李志坚, 等. 乳酸菌在泡菜中的作用及其应用现状[J]. 现代农业科技, 2025(7): 122-128. DOI:10.3969/j.issn.1007-5739.2025.07.029.
[38] 熊蝶, 袁岚玉, 李媛媛, 等. 陕西泡菜中降解亚硝酸盐乳酸菌的筛选及其发酵特性与耐受性研究[J]. 食品与发酵工业, 2021, 47(6): 139-144. DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.025757.
[39] 钟源, 张雅雯, 吕健曼, 等. 广西酸笋微生物多样性分析及其乳酸菌的特性研究[J]. 中国调味品, 2023, 48(5): 1-9. DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2023.05.001.
[40] Galli V, Venturi M, Mari E, et al. Gamma-aminobutyric acid (GABA)production in fermented milk by lactic acid bacteria isolated from spontaneous raw milk fermentation[J]. International Dairy Journal,2022, 127: 105284. DOI:10.1016/j.idairyj.2021.105284.
[41] 张甜, 刘艳全, 丁真真, 等. 传统发酵酸乳中乳酸菌的分离鉴定[J].中国调味品, 2020, 45(2): 40-42; 48. DOI:10.3969/j.issn.1000-9973.2020.02.010.
[42] 李欢, 潘道东, 吴振, 等. 产GABA乳酸菌的筛选鉴定及其发酵条件研究[J]. 食品工业科技, 2020, 41(23): 78-84. DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2019030272.
[43] Parlindungan E, Lugli G A, Ventura M, et al. Lactic acid bacteria diversity and characterization of probiotic candidates in fermented meats[J]. Foods, 2021, 10(7): 1519. DOI:10.3390/foods10071519.
[44] 向微微, 叶梦珺, 候萌, 等. 一株羊源弯曲乳杆菌的分离及安全性评价[J]. 动物营养学报, 2022, 34(10): 6790-6800. DOI:10.3969/j.issn.1006-267x.2022.10.071.